Robust expression in yeast cells of a reporter gene driven by rumen protozoal promoter sequences

Le but de cette étude était d’identifier des gènes dont le niveau d’expression est relativement élevé chez le protozoaire du rumen Isotricha intestinalis et de démontrer que les promoteurs de ce genre de gènes peuvent être utilisés dans la construction de vecteurs d’expression recombinants. Pour trouver les gènes à niveau d’expression élevé, nous avons construit une bibliothèque d’ADNc de I. intestinalis et analysé l’expression de l’ARN de 62 clones par hybridation au moyen d’une puce sur filtre. Le niveau d’expression individuel des clones allait de facilement détectable à un niveau inférieur au seuil de détection de la technique. Nous avons trouvé 11 ADNc à signal d’hybridation relativement intense, et nous avons caractérisé en détail le gène de l’un de ces clones, le I87. Nous avons évalué l’aptitude du promoteur I87 à diriger l’expression de gènes recombinants en le liant au gène rapporteur de la luciférase dans un vecteur navette à levure que nous avons utilisé pour transformer des cellules de Saccharomyces cerevisiae afin de faire une analyse d’expression. Les résultats révèlent qu’un promoteur de protozoaire ruminal peut diriger l’expression d’un gène rapporteur chez S. cerevisiae.