Vitrification of immature bovine cumulus-oocyte complexes: Effects of cryoprotectants, the vitrification procedure and warming time on cleavage and embryo development

Contexte. Les travaux que nous présentons ici visaient à évaluer les effets des cryoprotecteurs, de la vitrification et du temps passé dans une solution de réchauffement contenant du saccharose sur le clivage et le développement embryonnaire de complexes immatures (stade VG) de cumulus-ovocytes (CCO) bovins.
Méthode. Nous avons procédé à deux expériences. Dans la première (expérience 1), 420 CCO ont été répartis au hasard en quatre groupes : 1) groupe témoin : aucun traitement; 2) groupe VS1 : CCO exposés à une solution de vitrification 1 (SV1) contenant de l’éthylène glycol [EG] à 7,5 %, du diméthylsufoxyde [DMSO] à 7,5 % et du sérum de veau [SV] à  20 % dans du milieu TCM‑199, 37 ºC × 5 min; 3) groupe VS1 + VS2 : CCO exposés au milieu VS1 pendant 5 min, puis au milieu VS2 (EG à 15 %  + DMSO à 15 %  + saccharose à  17,1 %  + SV à 20 %), 37 ºC × 45‑60‑ secondes; et 4) groupe vitrifié : CCO exposés au VS1 et au VS2, placés dans des paillettes Cryotop, vitrifiés dans de l’azote liquide, puis réchauffés dans du milieu TCM‑199  + saccharose à  17,1 %  + SV à 20 % CS, 37 ºC × 1 minute. Dans la deuxième expérience (expérience 2), 581 CCO ont été répartis en quatre groupes comme dans l’expérience 1, mais les CCO des groupes VS1, VS1 + VS2 et vitrifiés, ont été subdivisés et exposés à la solution de réchauffement pendant soit une minute ou cinq minutes. Après le traitement et/ou le réchauffement, tous les CCO des deux expériences ont maturé in vitro, puis ont été fécondés et cultivés in vitro.
Résultats. Dans les eux expérience, les taux de clivage embryonnaire et de production de blastocystes ne différaient pas entre les groupes témoin, VS1 et VS1 + VS2. Dans l’expérience 2, le temps passé dans la solution de réchauffement n’a pas influé sur les résultats, mais les taux de clivage embryonnaire et de production de blastocystes étaient plus faibles (P  <  0,001) dans le groupe vitrifié que dans le groupe témoin, VS1 et VS1 + VS2 (40,9 et 1,6 % vs 92,2 et 34,4 %, 79,4 et 25,2 %, et 80,2 et 20,8 %, respectivement dans l’expérience 1, et 25,0 et 1,7 % vs 75,3 et 27,2 %, 67,9 et 19,5 %, et 62,7 et 22,5 %, respectivement dans l’expérience 2).
Conclusion. Chez les CCO de bovins immatures, les cryoprotecteurs pénétrants (EG et DMSO) présents dans les solutions VS1 et VS2 et le temps passé dans la solution de réchauffement contenant du saccharose n’ont eu aucun effet nuisible sur le taux de clivage embryonnaire ni sur le taux de production de blastocystes. Après la vitrification et le réchauffement, nous avons toutefois observé une réduction du taux de clivage et du développement des embryons au cours des premiers stades.