Identification of a lectin protein from black turtle bean (Phaseolus vulgaris) using LC-MS/MS and PCR method

Nous avons identifié une lectine de 31 KDa du petit haricot noir (Phaseolus vulgaris), et déterminé le segment d’ADN qui code la protéine par clonage et analyse de séquence. La fraction protéique a été séparée par SDS-PAGE et digérée avec de la trypsine. Les fragments peptidiques ont été analysés par LC-MS/MS. Pour identifier les peptides homologues, nous avons utilisé un logiciel de séquençage de novo, la base de données NCBI et le programme MS-BLAST. Nous avons aussi utilisé les résultats de la spectrométrie de masse pour obtenir la séquence codante de la lectine par PCR. L’analyse de la séquence a été faite avec les systèmes Clustal W2 et MEGA 5. L’analyse par spectrométrie de masse a permis de séquencer 52 % de la protéine qui a été identifiée comme étant une lectine fortement homologue à une phytohémagglutinine (PHA). Le fragment complet d’ADNc de cette lectine (KF601826) avec ses 934 pb a été amplifié : il contenait un domaine principal hautement conservé de la région lectin_legume_LecRK_Arcelin_ConA. L’alignement multiple et l’analyse phylogénétique indiquent clairement que la lectine appartient à la famille des PHA, et qu’elle pourrait avoir évolué du variant Arc7. Ces résultats peuvent servir de base aux études futures sur le contrôle de la salubrité des aliments et les propriétés biologiques des lectines.