Caractère inapproprié de la solution RNAlater pour conserver Caenorhabditis elegans en vue de l’extraction d’ARN
Citation
Jiang, L., Li, L., Kang, P., Yu, H., Nie, S.P., Xie, M.Y., Gong, J. (2019). Inappropriateness of RNAlater to preserve Caenorhabditis elegans for RNA extraction. MethodsX, [online] 6 2460-2467. http://dx.doi.org/10.1016/j.mex.2019.10.015
Résumé en langage clair
Caenorhabditis elegans est un modèle d’animal de laboratoire bien établi qui a été largement utilisé en recherche biologique. Il n’en demeure pas moins qu’il est difficile d’obtenir une bonne quantité d’ARN de qualité à partir d’un nombre limité de C. elegans pour les études d’expression génique. Pour résoudre ce problème, nous avons comparé différentes conditions de préservation de C. elegans en vue de l’extraction d’ARN après l’échec de l’utilisation des vers conservés dans une solution de RNAlater. Les effets de différentes concentrations de protéinase K, de vers à différents stades de vie et de différentes quantités de vers sur l’extraction d’ARN ont également été étudiés. Les meilleurs résultats ont été obtenus dans les conditions suivantes : 1) vers adultes fraîchement préparés ou rapidement congelés dans l’azote liquide, puis conservés à -80 °C; 2) lyse de C. elegans par la protéinase K (1 mg/ml) dans un tampon de lyse (65 °C pendant 10 min) avant l’extraction avec le réactif TRIzol. Cette méthode fournit un moyen stable, rapide et efficace d’extraire l’ARN d’un nombre de C. elegans variant de 20 à 200.
Résumé
© 2019. Caenorhabditis elegans est un modèle d’animal de laboratoire bien établi qui a été largement utilisé en recherche biologique. Il n’en demeure pas moins qu’il est difficile d’obtenir une bonne quantité d’ARN de qualité à partir d’un nombre limité de C. elegans pour les études d’expression génique. Pour résoudre ce problème, nous avons comparé différentes conditions de préservation de C. elegans en vue de l’extraction d’ARN après l’échec de l’utilisation des vers conservés dans une solution de RNAlater. Les effets de différentes concentrations de protéinase K, de vers à différents stades de vie et de différentes quantités de vers sur l’extraction d’ARN ont également été étudiés. Les meilleurs résultats ont été obtenus dans les conditions suivantes : 1) vers adultes fraîchement préparés ou rapidement congelés dans de l’azote liquide, puis conservés à -80 °C; 2) lyse de C. elegans par la protéinase K (1 mg/ml) dans un tampon de lyse (65 °C pendant 10 min) avant l’extraction avec le réactif TRIzol. Cette méthode fournit un moyen stable, rapide et efficace d’extraire l’ARN d’un nombre de C. elegans variant de 20 à 200. • La solution ARNlater ne convenait pas pour conserver C. elegans en vue d’une extraction efficace de l’ARN. • La protéinase K a été vérifiée pour lyser un nombre limité de C. elegans en vue de l’extraction d’ARN.