A simple and high-throughput method to assess maturation status of bovine oocytes: Comparison of anti-lamin A/C-DAPI with an aceto-orcein staining technique

Il faut une méthode fiable, non ambiguë et à grand débit pour évaluer la maturation nucléaire des ovocytes mammaliens. Dans cette étude, nous avons comparé l’efficacité et la facilité d’utilisation d’une technique simplifiée d’imagerie par fluorescence (anti‑lamines A/C et 4',6‑diamidino‑2‑phénylindole [DAPI]) par rapport à la technique habituelle (coloration à l’acéto‑orcéine) pour évaluer la maturation nucléaire des ovocytes de bovins et déterminer la cinétique de cette maturation. Dans l’expérience 1, la maturation des ovocytes s’est faite in vitro, après quoi certains ont été colorés à l’acéto-orcéine et d’autres avec les anti-lamines A/C-DAPI. Les proportions d’ovocytes perdus pendant les manipulations techniques et celles des cellules ne pouvant être classifiées en raison de leur morphologie ambiguë étaient plus faibles (P < 0,0001) avec la technique de coloration anti-lamines A/C-DAPI (9 % et 2 %, respectivement) qu’avec l’acéto-orcéine (31 % et 13 %, respectivement). La technique avec les anti-lamines A/C et le DAPI s’est révélée rapide : elle pouvait être faite en 7 heures après la maturation, comparativement aux 24 heures et plus requises pour la technique à l’acéto-orcéine. De plus, avec la technique anti-lamines A/C‑DAPI, plus de 200 ovocytes d’un même lot pouvaient être colorés en même temps. Dans l’expérience 2, nous avons surveillé la cinétique de maturation nucléaire des ovocytes de bovins à différents intervalles (0, 6, 12 et 22 h) durant la maturation in vitro (MIV) avec la technique des anti-lamines A/C-DAPI. Nous avons constaté, aux temps 0, 6, 12 et 22 heures, respectivement, la prédominance d’ovocytes des stades suivants : vésicule germinative, rupture de la vésicule germinative, métaphase I et métaphase II. Nous concluons que la technique aux anti-lamines A/C-DAPI est simple et efficace et qu’elle permet d’évaluer de façon non ambiguë l’état de maturation nucléaire d’un grand nombre d’ovocytes en peu de temps.