Effet du cholestérol ajouté avant la vitrification sur la cryotolérance des ovocytes de bovins immatures et ceux qui ont atteint la maturité in vitro
Citation
Arcarons, N., Morató, R., Vendrell, M., Yeste, M., López-Bejar, M., Rajapaksha, K., Anzar, M., Mogas, T. (2017). Cholesterol added prior to vitrification on the cryotolerance of immature and in vitro matured bovine oocytes. PLoS ONE, [online] 12(9), http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0184714
Résumé en langage clair
La surgélation des ovocytes de mammifères est très importante pour la conservation du bagage génétique femelle des espèces menacées. La surgélation des ovocytes est plus difficile que la surgélation du sperme et des embryons de mammifères. Différentes méthodes ont été essayées pour améliorer la survie des ovocytes après la surgélation. Le taux de cholestérol dans la membrane cellulaire joue un rôle important dans la résistance au choc dû au froid de la surgélation. Dans cette étude, nous avons vérifié si l'incorporation de cholestérol dans la membrane des ovocytes de bovins permettait d’améliorer leur tolérance à la surgélation. Des ovocytes de bovins qui ont atteint la maturité en laboratoire ont été incubés avec du cholestérol lié à des colorants. Nous avons ensuite évalué les effets des concentrations de cholestérol et du temps d'incubation avant la surgélation sur le développement précoce des embryons. Ensuite, nous avons examiné les effets d'un prétraitement au cholestérol pendant 30 minutes avant la vitrification d'ovocytes immatures et d’ovocytes mûris in vitro sur la compétence développementale et l'expression génique. Nos résultats montrent que la membrane plasmique est marquée après 30 minutes d'incubation avec 2 mg/ml de cholestérol. Nous avons aussi constaté une relation inverse entre la concentration de cholestérol et le temps d'incubation. Le traitement au cholestérol avant la surgélation des ovocytes de vache n'a pas eu d’effet sur les taux de clivage et de développement embryonnaire ultérieurs, et ce, quels que soient la concentration de cholestérol, la durée de l’incubation et le stade méiotique. Cependant, le cholestérol a amélioré l'expression des gènes liés à la qualité des embryons.
Résumé
© Arcarons et coll., 2017. Il s’agit d’un articleà accès libre publié conformément aux modalités de la licence d’attribution de Creative Commons, qui autorise l’utilisation, la distribution et la reproduction non restreintes dans tout média, à condition de citer adéquatement l’auteur et les travaux originaux. Cette étude vise à déterminer si l'incorporation de méthyl-β-cyclodextrine (CLC) chargée de cholestérol dans la membrane plasmatique des ovocytes de bovins améliore leur tolérance à la vitrification. Des ovocytes ayant atteint la maturité in vitro ont été incubés avec 2 mg/ml de CLC marquée au bore-dipyrométhene (BODIPY) pendant différents temps dans un milieu supplémenté de sérum de veau fœtal (SVF) ou de polyalcool de vinyle (PAV), ou exposés à différentes concentrations de CLC pour que nous puissions examiner la localisation subcellulaire du cholestérol par imagerie de cellules vivantes sous microscopie confocale. Nous avons évalué l’effet des concentrations optimisées de CLC et des temps d'incubation optimisés avant la vitrification sur le développement embryonnaire précoce. Ensuite, nous avons déterminé l’effet d’un prétraitement de 30 minutes, avec 2 mg/ml de CLC, avant la vitrification d’ovocytes immatures (VG) et d’ovocytes ayant atteint la maturité in vitro (MII) sur la compétence développementale et l'expression génique. Nos résultats indiquent une forte intensité de marquage de la membrane plasmique après 30 min d'incubation avec 2 mg/ml de CLC, quel que soit le milieu utilisé. Lorsque les ovocytes ont été incubés avec 1 mg/ml, 2 mg/ml et 3 mg/ml de CLC, un marquage intense de la membrane plasmatique a été observé après 40, 30 et 20 minutes, respectivement. Le prétraitement à la CLC avant la vitrification des ovocytes de bovins n'a pas influé sur les taux de clivage et de développement embryonnaire ultérieurs, et ce, quels que soient la concentration de CLC, le temps d'incubation ou le stade méiotique. Le prétraitement semble cependant améliorer la qualité des embryons issus d'ovocytes vitrifiés, principalement ceux vitrifiés au stade VG.